Sắc ký là gì? Các kỹ thuật sắc ký được dùng trong thí nghiệm

Sắc ký dựa trên khái niệm hệ số phân chia. Sự phân chia chất tan giữa hai dung môi là bất biến. Ứng dụng sắc ký dựa trên thực tế là chúng ta tạo ra một dung môi cố định (bằng cách hấp phụ trên nền đỡ rắn) và một thiết bị dịch chuyển. Nếu chất nền hoặc pha tĩnh có cực như giấy, silica, v.v. thì đó là sắc ký pha dương và nếu nó không phân cực (C-18) thì đó là pha đảo.

Sắc ký là một kỹ thuật quan trọng trong phòng thí nghiệm

1. Sắc ký là gì?

Sắc ký là một kỹ thuật trong phòng thí nghiệm để tách hỗn hợp. Hỗn hợp này được hòa tan trong chất lỏng gọi là pha động, chất lỏng này di chuyển qua môi trường chứa vật liệu khác gọi là pha tĩnh. Các thành phần khác nhau của hỗn hợp di chuyển với tốc độ khác nhau, khiến chúng tách ra. Sự phân hủy dựa trên sự phân chia vi sai giữa pha động và pha tĩnh. Sự khác biệt về hệ số phân chia của các hợp chất dẫn đến sự lưu giữ chênh lệch trên pha tĩnh, từ đó ảnh hưởng đến quá trình phân tách.

2. Mục đích sử dụng sắc ký

Sắc ký có thể được sử dụng để chuẩn bị hoặc phân tích:

– Sắc ký điều chế được sử dụng để tách các thành phần của hỗn hợp để sử dụng cho các thí nghiệm sau này chứ không phải để phân tích. Đây được coi là một hình thức sàng lọc.

– Sắc ký phân tích thường được thực hiện với lượng vật liệu nhỏ hơn và để xác định sự hiện diện hoặc đo tỷ lệ tương đối của chất phân tích trong hỗn hợp. Cả hai không loại trừ lẫn nhau.

3. Thuật ngữ sắc ký

– Chất phân tích là chất cần được tách ra trong quá trình sắc ký. Nó thường là các chất cần thiết để lấy hỗn hợp ban đầu.

– Sắc ký phân tích được sử dụng để xác định sự tồn tại và nồng độ của chất phân tích trong mẫu.

– Pha liên kết là pha tĩnh được liên kết cộng hóa trị với các hạt đỡ hoặc thành trong của ống cột.

– Sắc ký đồ là kết quả hình ảnh đầu ra của sắc ký. Trong trường hợp tách tối ưu, các pic hoặc mẫu khác nhau trên sắc ký đồ tương ứng với các thành phần khác nhau của hỗn hợp được tách.

Cột x của sắc ký đồ biểu thị thời gian lưu

+ Trục x biểu thị thời gian lưu

+ Trục y vẽ đồ thị tín hiệu tương ứng (thu được từ máy quang phổ, máy quang phổ khối hoặc các loại máy dò khác) do máy phân tích tạo ra từ hệ thống.

+ Trong trường hợp hệ thống tối ưu, tín hiệu tỷ lệ thuận với nồng độ chất phân tích cụ thể được tách.

– Máy sắc ký là thiết bị cho phép phân tách phức tạp như sắc ký khí hoặc sắc ký lỏng.

– Sắc ký là phương pháp phân tách vật lý nhằm phân phối các thành phần để phân tách giữa hai pha, một (pha tĩnh) và một (pha động) chuyển động theo một hướng xác định.

– Dung môi rửa giải là dung môi đưa chất phân tích pha động ra khỏi cột, chúng ta có thể gọi là nước thải.

– Eluite là chất phân tích và chất hòa tan.

– Eluotropic là danh sách các dung môi được xếp hạng theo cường độ rửa giải của chúng.

– Pha bất động là pha tĩnh được cố định trên các hạt đỡ hoặc trên thành trong của ống cột.

Tổng quan về sự phân chia sắc tố của sắc tố quang hợp

– Pha động là pha chuyển động có hướng xác định.

+ Có thể là chất lỏng (LC và điện hóa mao quản (CEC)), chất khí (GC) hoặc chất lỏng siêu tới hạn (sắc ký chất lỏng siêu tới hạn, SFC).

+ Pha động gồm mẫu cần tách hoặc phân tích và dung môi di chuyển mẫu qua cột. Trong trường hợp sắc ký cột lỏng áp suất cao (HPLC), pha động bao gồm dung môi không phân cực như hexane trong pha thường hoặc dung môi phân cực như metanol trong pha đảo của sắc ký và mẫu được tách ra.

+ Pha động di chuyển qua cột sắc ký (pha tĩnh) và mẫu tương tác với pha tĩnh sẽ được tách ra.

– Thời gian lưu là thời gian đặc trưng để một chất phân tích cụ thể đi qua hệ thống (từ đầu vào cột đến máy dò) trong các điều kiện đã đặt.

– Mẫu là hàm lượng được phân tích bằng sắc ký. Nó có thể bao gồm một thành phần duy nhất hoặc hỗn hợp các thành phần.

– Chất hòa tan là thành phần mẫu trong sắc ký phân vùng.

– Dung môi là chất có khả năng hòa tan một chất khác, đặc biệt là pha động lỏng trong sắc ký lỏng.

– Pha tĩnh là chất cố định tại chỗ cho quá trình sắc ký như silica trong sắc ký lớp mỏng.

– Máy dò là công cụ dùng để phát hiện định tính và định lượng các chất phân tích sau khi tách.

Máy dò giúp phát hiện chất lượng và định lượng các chất sau khi phân tích

4. Kỹ thuật sắc ký

4.1. Sắc ký cột

– Sắc ký cột là phương pháp sắc ký tách và định lượng các chất sinh học dưới áp suất cao, giúp giảm đáng kể thời gian, hiệu quả và chất lượng phân tích.

– Các hạt của pha tĩnh hoặc chất mang được phủ pha tĩnh lỏng có thể lấp đầy toàn bộ thể tích bên trong ống hoặc tập trung dọc theo thành ống bên trong để tạo đường đi thông thoáng, không hạn chế cho pha động ở giữa ống (cột ống hở).

– Sự chênh lệch tốc độ di chuyển qua môi trường được tính theo thời gian lưu khác nhau của mẫu.

Cách sử dụng sắc ký cột trong thí nghiệm

4.2. Sắc ký photphocellulose

– Sắc ký phosphocellulose sử dụng lực liên kết của nhiều protein liên kết DNA với phosphocellulose.

– Sự tương tác của protein với DNA càng mạnh thì nồng độ muối cần để rửa giải protein càng cao.

4.3. Sắc ký giấy

Sắc ký giấy là một kỹ thuật bao gồm việc đặt một điểm nhỏ hoặc dòng dung dịch mẫu lên một dải giấy sắc ký. Giấy được đặt trong một thùng chứa có phủ một lớp dung môi nông và đậy kín.

– Khi dung môi dâng lên qua giấy, nó gặp hỗn hợp mẫu và bắt đầu di chuyển lên giấy cùng với dung môi.

– Loại giấy này được làm từ xenlulo, một chất phân cực và các hợp chất trong hỗn hợp sẽ di chuyển xa hơn nếu chúng không phân cực. Nhiều chất phân cực liên kết với giấy xenlulo nhanh hơn và do đó không di chuyển xa.

Giấy sắc ký được làm từ xenlulo

4.3. Sắc ký lớp mỏng (TLC)

– Sắc ký lớp mỏng (TLC) là một kỹ thuật trong phòng thí nghiệm được sử dụng rộng rãi để tách các chất sinh hóa khác nhau trên cơ sở sức hút tương đối của chúng với pha tĩnh và pha động.

– Tương tự như sắc ký giấy. Tuy nhiên, thay vì sử dụng pha giấy tĩnh, nó bao gồm pha tĩnh của một lớp chất hấp phụ mỏng như silica gel, alumina hoặc cellulose trên nền phẳng, trơ.

– TLC phù hợp cho các ứng dụng sàng lọc như kiểm tra nồng độ thuốc và độ tinh khiết của nước vì khả năng lây nhiễm chéo thấp do mỗi lần phân tách được thực hiện trên một lớp mới.

Sắc ký lớp mỏng thích hợp cho các ứng dụng sàng lọc

4.4. Sắc ký dịch chuyển

Nguyên tắc cơ bản của sắc ký dịch chuyển là một phân tử có ái lực cao với nền sắc ký (chất dịch chuyển) cạnh tranh hiệu quả ở các vị trí liên kết để dịch chuyển tất cả các phân tử có ái lực thấp hơn.

5. Mua giấy sắc ký Whatman chất lượng – giá tốt tại Hà Nội

Hiện nay, LabTrường Chu Văn An là đơn vị hàng đầu trong lĩnh vực nhập khẩu và phân phối hóa chất, dụng cụ thí nghiệm và thiết bị khoa học kỹ thuật hàng đầu tại Việt Nam, trong đó các sản phẩm bao gồm: Giấy sắc ký Whatman chất lượng có sẵn với số lượng lớn. Đây cũng là loại giấy sắc ký được nhiều khách hàng lựa chọn trong thời gian qua bởi những tính năng vượt trội như:

– Ứng dụng trong điện phân có kích thước phân tử lớn

– Được sản xuất từ ​​cellulose nguyên chất, không có chất phụ gia

– Kết quả khá tốt khi sử dụng trong các phân tích thông thường, cho các kỹ thuật sắc ký và phân tích thông thường

– Rất phù hợp khi cần phân tích nhanh và không cần kết quả có độ phân giải cao.

Giấy sắc ký Whatman được sản xuất từ ​​xenlulo nguyên chất

Một số loại giấy sắc ký Whatman được nhiều người lựa chọn tại LabTrường Chu Văn An

– Giấy sắc ký 31ET, Whatman 15cmx100m

– Giấy chấm sắc ký 3MMCHR, Whatman 10cmx100m

– Giấy sắc ký số 1, 0.18mm 46x57cm Whatman

Với sản phẩm Giấy sắc ký Whatman, Chúng tôi luôn mong muốn làm hài lòng quý khách hàng. Để biết thêm thông tin về sản phẩm, vui lòng truy cập website labvietchem.com.vn hoặc liên hệ trực tiếp số hotline 1900 2639 để nhận được hỗ trợ và báo giá tốt nhất.

Câu hỏi thường gặp

1. Sắc ký có thể phân tích những loại hợp chất nào?

Sắc ký có thể phân tích các hợp chất hữu cơ, hợp chất vô cơ, protein, peptide, carbohydrate, lipid và nhiều loại khác.

2. Sắc ký lỏng và sắc ký khí khác nhau như thế nào?

Sắc ký lỏng sử dụng dung môi lỏng làm pha động, thích hợp cho các hợp chất ít bay hơi. Sắc ký khí sử dụng khí trơ làm pha động, thích hợp cho các chất dễ bay hơi.

3. Có thể sử dụng sắc ký để phát hiện chất cấm trong thể thao?

Đúng vậy, sắc ký là một công cụ quan trọng trong kiểm tra doping thể thao, giúp phát hiện các chất kích thích và hormone tổng hợp.

4. Tại sao sắc ký HPLC phổ biến trong dược phẩm?

HPLC có độ phân giải cao, giúp phân tích chính xác nồng độ thuốc trong mẫu sinh học và kiểm tra chất lượng dược phẩm.

5. Mất bao lâu để thực hiện phân tích sắc ký?

Thời gian có thể dao động từ vài phút đến vài giờ, tùy thuộc vào phương pháp được sử dụng và tính chất của mẫu được phân tích.

6. Có cách nào để tăng hiệu suất tách trong sắc ký không?

Có, có thể tối ưu hóa cột sắc ký, thay đổi dung môi pha động và điều chỉnh nhiệt độ và áp suất.

Thẩm quyền giải quyết:

• Thiết kế Baume là gì? Cách sử dụng và chuyển đổi thang đo baume hiệu quả
• tỷ trọng kế là gì? Cấu tạo và cách sử dụng tỷ trọng kế